GFP 成像

绿色荧光蛋白(GFP)是一种从水母Aequorea victoria中分离出的27kDa蛋白。该蛋白受紫外线照射可发出绿色的荧光。现已对cDNA进行克隆,并置于高水平的表达载体中,其中专为在涵盖植物到哺乳动物细胞的有机体中使用进行了优化。借助这种cDNA的可用性,即可使用标准转染和选择方法将GFP方便地引入几乎任意的细胞类型,从而形成稳定的细胞谱系,并保持GFP表达。

GFP与其他蛋白融合会产生标记蛋白,可以组成性地对其进行原位表达,以备长期研究之用。当将GFP添加到融合伴侣的NH2或COOH末端时,这些嵌合蛋白一般能保持正常功能。因此,在活细胞制备时,非常适合采用GFP来标记细胞蛋白,以遵循它们的时空定位。

在选择相机对活细胞中的GFP嵌合体进行成像时,灵敏度是主要的考虑因素。而选择可最大化信噪比的低噪声相机也非常重要。此外,为了对细胞内的标记结构进行精确定位,应首选中等到高分辨率的探测器。