荧光成像

荧光指的是原子或分子吸收光线并以不同波长发射的能力。因为周边环境的微小变化会引起荧光特性出现较大变化,因此报道分子可用作灵敏探针。就微观层面而言,荧光团与细胞生物化学有关联。因此,以适当波长进行照明和探测可以揭示现pH值、离子浓度、核酸和蛋白质方面的变化。所产生的图像在暗背景上呈亮色。

由荧光分子而产生的光级通常非常低,但是照明曝光过度会造成样品的光漂白。Photometrics高性能CCD相机允许研究人员通过提供极高的灵敏度来降低光漂白。

尽管主观分析时视频显微镜很有用,但需要更高的精度和灵敏度才能产生定量结果。当将数值算法(例如反卷积、比率制分析、形态计量学)应用于单幅图像或图像栈时,就需要宽广强度范围内的相机响应线性度。此外,更高空间分辨率的相机可提供较大视场的详细信息。最后,Photometrics CCD 相机宽广的动态范围有助于查看相同图像内的暗对象(如神经突起)和相对较亮的对象(如细胞体)。

Fluorescence Imaging
图片由Photometrics提供

牛肺动脉内皮细胞(分子探针Fluocells #2)如上面的三色合成图像所示。在与荧光团BODIPY、Texas Red和DAPI相对应的谱带中单独采集到的图像分别显示上管、纤维性肌动蛋白和胞核。这种连续采集方法有助于最佳化单独的图像,并由此补偿探针浓度和相机灵敏度方面的差异。